药学论文 丙泊酚用于肝功能损伤.doc

丙泊酚用于肝功能损伤患者的药代动力学研究摘要目的应用气相色谱质谱GSMS法测定人血浆中丙泊酚的血药浓度并比较丙泊酚用于肝功能损伤患者与肝功能正常患者的药代动力学参数方法6例进行内镜下食道静脉曲张套扎术EVL和硬化术EVS的肝功能损伤患者1组和6例肝功能正常患者2组静脉注射丙泊酚在麻醉前及251015202530456080100120min各时间点采集静脉血2ml离心65保存应用气相色谱质谱GSMS法测定以色谱柱为HP5MS毛细管柱30m025mm025m载气为高纯He载气流速为10mLmin1质谱离子源EI温度为230电子轰击能量70eV全离子扫描以麝香草酚为内标样品用乙腈沉淀蛋白后取上清液进样分析结果丙泊酚的药代动力学符合三室开放模型用DASver20软件计算药代动力学参数本方法回收率高重现性好丙泊酚血药浓度在0258gml范围内线性关系良好r09987最低检测浓度为gmL低中高3个浓度的日内和日间RSD均在15之内与肝功能正常组比较肝功能损伤组的各参数间无显著性差异P005结论肝功能损伤患者丙泊酚的药代动力学特征与肝功能正常患者无明显差异故临床进行内镜下食道静脉曲张套扎术EVL和硬化术EVS时用丙泊酚麻醉安全有效关键词丙泊酚肝功能损伤药代动力学气相色谱质谱法PharmacokineticsofPropofolusedinpatientswithliverinjuryAbstract6530m025mm025mThecarriergaswashighpurityHeatarateof10mLmin1MSionsourceEItemperaturewas230electronimpactenergywas70eVtotalionscanThymolworkedasinternalstandardthesampletreatmentforpropofolinvolvedasimpleproteinprecipitationwithacetonitrileanddirectlyinjectedintotheGCMSsystmRESULTSpharmacokineticsofpropofolwasdescribedbyathreecompartmentpharmacokineticmodelpharmacokineticparameterswasanalyzedbyDAS20softwareThemethodisofhighrecoveryandgoodreproducibilityThelinearrangwas0258gmlr09987ThelimitdetectionwasgmLRSDofintradayandinterdayvalidationwerelessthan15ComparedwithnormalliverfunctionallparametersofliverinjurygrouphasnosignificantdifferenceP005CONCLUSIONpharmacokineticsofpropofolhasnosignificantdifferencebetweenpatientswithliverinjuryandpatientswithnormalliverfunctionThereforeitissafeandeffectivetoconductclinicalendoscopicvaricealligationEVLandsclerotherapyEVSduringanesthesiawithpropofol引言丙泊酚propofol又称异丙酚为烷基酚类短效静脉麻醉药具有静脉注射后迅速分布于全身起效快作用时间短苏醒迅速完全不良反应少不留后遗症剂量易于掌握等优点12丙泊酚具有分布容积大清除率高分布和消除迅速再分布缓慢等药代动力学特点大部分通过肝脏代谢成为水溶性葡萄糖醛酸和硫酸盐结合物主要由尿液排出3实验表明4丙泊酚的全身清除速度超过了肝脏血流速度由此证明其同时存在肝外代谢和肾外清除反复给药或静脉输注时无蓄积除年龄因素外其它因素一般不引起药代学曲线的显著变化4丙泊酚主要用于全身麻醉的诱导和维持与硫喷妥钠联合使用可以减轻不良反应及降低费用5而本研究采用的是丙泊酚瑞芬太尼复合静脉麻醉瑞芬太尼丙泊酚静脉复合麻醉在全麻中的应用可较好的控制麻醉深度指导合理用药避免患者术中知晓有助于术后恢复并不引起丙泊酚药代动力学的改变6因此可以不考虑瑞芬太尼的作用通过不同时间点血药浓度监测其药代动力学的分析比较判断肝功能是否对丙泊酚的药代动力学有影响关于丙泊酚血药浓度的检测国内主要采用高效液相色谱法HPLC但该方法费时需要标本量较多气相色谱质谱gaschromatographymassspectrometryGCMS法是一种准确灵敏并能够稳定和重复测定的检测方法省时需要标本量较少但相比于高效液相色谱法目前此法还不是十分成熟本研究以采用气相色谱质谱法测定丙泊酚的血药浓度探讨肝功能对丙泊酚的药代动力学的影响旨在为临床合理用药保证安全避免不良反应提供确切而科学的理论依据资料与方法11试验对象肝功能损伤进行内镜下食道静脉曲张套扎术EVL和硬化术EVS的患者6例另以肝功能正常患者6例进行相同的手术为对照选择的所有患者于实验前签订知情同意书并交院伦理委员会审核12麻醉方法在手术前所有患者分别静脉注射瑞芬太尼20mlkg丙泊酚15mlkg5min后注射第二剂丙泊酚05mlkg进行麻醉按时间点采集血样13血标本采集及处理在静脉麻醉前及251015202530456080100120min各时间点采集静脉血2ml置入肝素抗凝试管即刻离心3000rmin取血浆至于65冰箱保存直至测定丙泊酚血药浓度14丙泊酚血药浓度测定及数据处理141实验仪器电子分析天平AB204A梅特勒托利多上海仪器公司涡旋混合器XW80上海医科大学仪器厂气质联用仪美国安捷伦6890N5975BGCMSD142试剂丙泊酚标准品麝香草酚分析纯天津市丙泊酚注射液北京费森尤斯卡比医药有限公司批号10CH5153甲醇一级色谱纯天津市四友生物医学技术有限公司批号080713105乙腈一级色谱纯天津市四友生物医学技术有限公司批号080826101143内标溶液的配制用灵敏度为01mg的电子天平准确称取麝香草酚标准品用甲醇溶解于100mL容量瓶内定容最终浓度为100ugml然后用甲醇稀释成浓度为5的标准应用液内标应用液144色谱条件色谱柱为HP5MS毛细管柱30m025mm025m载气为高纯He载气流速为10mLmin1进样口温度为250进样方式为分流进样进样量1L分流比51升温程序起始温度100以20min1升温到250质谱接口温度250离子源EI温度为230电子轰击能量70eV四极杆温度为150扫描范围40550amu全离子扫描溶剂延迟为50min选择离子采集SIM丙泊酚碎片离子mz为163麝香草酚碎片离子mz为135GCMSSIM分成两组组设定135组设定163145样品的预处理过程取血浆02ml于具塞玻璃试管中准确加入内标液100l2gml轻摇混匀1ml蒸馏水漩涡混匀02ml的硼酸盐缓冲剂PH9翻转混匀20rmin5min加乙腈混匀离心3900rmin10min后被分成两层取上清液750l转移至具塞玻璃试管中取50l进样分析146标准曲线的制备取6只10具塞试管依次加入不同浓度不同体积的丙泊酚标准工作溶液再加入空白血浆200ul配成浓度相当于0401002004008001000的血浆样品再按血浆处理方法处理后测定丙泊酚峰面积Ai内标峰面积As以AiAs为纵坐标以所对应各点浓度C为横坐标绘制标准曲线15药代动力学分析采用DASver20软件进行分析根据停药后的浓度时间拟合关系进行运算房室模型选择用AIC值比较同一权重下选择AIC值最小的模型进行数据拟合16统计学处理采用SPSS110软件正态分布的计量资料以s表示偏态分布资料用中位数极差MR表示经转换后符合正态分布组间比较采用t检验计数资料采用X2检验2结果21色谱行为在上述色谱条件下丙泊酚与内标物分离良好血浆中的杂质不干扰测定色谱图见图1AabBabA丙泊酚标准品和内标B血浆样品a内标b丙泊酚22标准曲线及检测限标准曲线回归方程为C16993AiAs01512r09975表明血药浓度在0258gml范围内有良好的线性关系最低检测浓度为gmL标准曲线见图2图2丙泊酚血药浓度的标准曲线23回收率试验231相对回收率取空白血浆15份每份200ul各加不同量的丙泊酚标准工作溶液配成低中高三种浓度0402001000gmL的血浆标准品溶液每种浓度5份再按血浆样品处理方法处理后测定依据标准曲线计算检测量以检测量与加入量的比值计算相对回收率上述三种浓度测定结果均在85115范围内结果见表绝对回收率取空白血浆15份每份200ul各加不同量的丙泊酚标准工作溶液配成低中高三种浓度0402001000gmL的血浆标准品溶液每种浓度5份再按血浆样品处理方法处理后测定记录丙泊酚的峰面积为该浓度血浆标准的峰面积另取15mlEP管三个一组每组加入与配制血浆标准品溶液相同的丙泊酚标准品溶液直接加750ul乙腈离心取上清50L进样检测记录不同浓度丙泊酚的峰面积为该浓度的纯标准品的峰面积计算血浆标准的峰面积与纯标的峰面积的比值即为绝对回收率结果见表表1人血浆中丙泊酚的回收率sn5浓度gmL相对回收率绝对回收率04010180486533020086742838322211100010002328858631324精密度241日内精密度取空白血浆15份每份200ul各加不同量的丙泊酚标准工作溶液配成低中高三种浓度0402001000gmL的血浆标准品溶液每种浓度5份再按血浆样品处理方法处理各浓度分别在同一日内测定计算日内精密度上述三种浓度测定结果的RSD均小于10结果见表242日间精密度取空白血浆15份每份200ul各加不同量的丙泊酚标准工作溶液配成低中高三种浓度0402001000gmL的血浆标准品溶液每种浓度5份再按血浆样品处理方法处理在连续不同日内重复测定次计算日间精密度上述三种浓度测定结果的RSD均在10范围内结果见表表2丙泊酚日内日间精密度测定结果n5浓度mgL日内RSD日间RSD045214632074460280725311样品稳定性1室温放置和冰冻保存血浆样品的稳定性配制低中高三个浓度的丙泊酚标准血浆样品溶液每个浓度份其中份在室温下放置小时后再经血浆样品处理方法处理后进样检测记录结果另外份分别在冰箱冰冻保存周周和周后再经血浆样品处理方法处理后进样检测结果显示丙泊酚血浆样品在室温放置小时以内测定结果没有明显变化在冰箱冰冻条件下冷藏一个月内测定结果同样没有明显变化说明血浆样品在室温放置和冰冻保存的条件下均有很好的稳定性冻融条件下血浆样品的稳定性配制低中高三个浓度的丙泊酚血浆标准溶液每个浓度放置冰箱后解冻各取血浆样品检测剩余的血浆样品再次放入冰箱中后解冻各取血浆样品检测重复次考察其稳定性结果显示冻融条件对血浆样品的检测结果没有明显的影响表3两组丙泊酚药代动力学参数比较n6s参数1组2组T12h001300500110002T12h018009019011T12h30122810K311h065030066030K211h165146K101h115104K121h3993710K131h105104ClLkgh234022157024VLkg7022650251组2组分别为肝功能损伤患者和肝功能正常患者组3讨论研究表明丙泊酚作为临床广泛应用的静脉麻醉剂在用于不同程度肝功能损伤患者进行内镜下食道静脉套扎术EVL和硬化术EVS时麻醉效果良好目前有关肝功能损伤患者丙泊酚的药代动力学很少报道并且较少用气相色谱质谱GSMS法测定丙泊酚的血药浓度本研究选择肝功能损伤的患者及肝功能正常患者为研究对象结果表明丙泊酚药代动力学符合开放性三室模型肝功能对丙泊酚药代动力学无明显影响结果与文献78报道相似肝脏是体内唯一合成白蛋白的器官肝功能损伤时白蛋白合成必然减少同时在肝功能损伤时机体往往会并发内毒素血症和细菌感染也会造成白蛋白合成减少及分解增加这些都会造成血液中白蛋白水平降低丙泊酚与血浆蛋白的结合程度较高在其血药浓度为0120gmL范围内98与血浆蛋白相结合9并且是与血浆白蛋白相结合为主10研究7认为血液中丙泊酚和蛋白类物质的结合降低其游离部分必然会增加这样更多的药物将被器官和组织摄取分布容积就会增大本研究的结果与该结论相一致丙泊酚主要在肝脏代谢88的代谢产物由尿排出11体内清除率快于肝脏血流提示肝外可能还有其他脏器如肺肾参与清除本试验采用的气相色谱质谱法检测血浆丙泊酚浓度专属性高相对回收率均在85115范围内绝对回收率大于80日内和日间变异均小于符合生物等效性研究的要求适合丙泊酚的药代动力学研究本研究建立的血浆丙泊酚检测的方法操作简单分离完全结果可靠回收率高线性范围宽参考文献1庄心良曾因明现代麻醉学M3版北京人民卫生出版社2OO34814872张守娥胡雪峰刘玉才新型麻醉药丙泊酚JHeraldofMedicine19991853543夏东亚许霁虹王彦等高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度J解放军药学学报20052132292314王钟兴黄文起静脉麻醉药丙泊酚的临床应用J新医学20033421091115NaguibMSariKouzalAThiopentonepropofolhypnoticsynergisminpatientJBrJAnaesth199167126王树林瑞芬太尼丙泊酚静脉复合麻醉在全麻中的应用J中外医疗2009101697傅丽红冉国侠许伟彬等异丙酚临床药物动力学研究J中国医院药学杂志199717251538涂发平罗朝志罗南富肝功能衰竭患者靶控输注丙泊酚的药代动力学J第三军医大学学报20083019185218549MazoitJXSamiiKBindingofpropofoltobloodcomponentsimplicationsforpharmacokineticsandforpharmacodynamicsJBrJClinPhamacol1999471354210ServinFDesmontsJMHabererJPetalPharmacokineticsandproteinbindingofpropofolinpatientswithcirrhosisJAnesthesiology198869688789111谢荣主编麻醉学M第3版北京科学出版社1994798012李庆民潘阳丙泊酚的GC法测定J中国医药工业杂志2000318361362郑宏曹兴华王江刘进气相色谱质谱法测定丙泊酚血药浓度J中华麻醉学杂志20042417172