阿司匹林实验报告.docx

阿司匹林实验报告 一、实验目的 ①通过对阿司匹林肠溶片的药物分析，培养药品质量全面控制的观念，掌握药物分析研究的方法和技能。 ②掌握药物的鉴别、检查、含量测定的规律和方法。 ③掌握药物质量研究中的现代分析技术与进展。 二、实验原理 鉴别:显色法 杂质检查:比色法 两步滴定:将一种已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液 中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止，根据试剂溶液的浓度和消耗的体积，计算被测物质的含量。 紫外分光光度法：物质分子对紫外光区（波长为200-400nm）和可见光区(波长为400-760nm)的单色光的辐射吸收有不同的特性。 HPLC法：混合物中各组分的色谱行为差异，将各组分从混合物中分离后再选择性对待测组分进行分析。 三、实验内容(阿司匹林肠溶片标示量：25mg) ㈠阿司匹林肠溶片的鉴别 性状鉴别 本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。 2.化学鉴别 I．取本品的细粉0.3090g(约相当于阿司匹林 0.1g)，加水10ml,煮沸，放冷，加三氯化铁试液(9g→100ml)1滴,应显紫堇色。同时用阿司匹林对照品作对照，并做阴性干扰试验，对照品所产生的颜色与样品相同，阴性无干扰。 II．取本品的细粉1.5463g（约相当于0.5g），加碳酸钠试液(5g→100ml)10ml，煮沸2 分钟后，放冷，加过量的稀硫酸(浓硫酸57ml→1000ml)，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气. 3.薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：取本品细粉0.1546g(约相当于阿司匹林50 mg)，加乙醇5 ml，振摇溶解，静置，取上清液，即得。 ②参比物溶液的制备：取复方甲恶唑细粉0.2046g，研细，加乙醇19.45 ml 溶解，静置，取上清液即得。 ③对照品溶液制备：取阿司匹林对照品50mg，加乙醇5ml,振摇溶解，静置，取上清液，即得。 ④取参比物溶液，对照品溶液和供试品溶液各2 μl，点样于硅胶GF254板（快检专用薄层板），将正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶5∶1）混合液8～10 ml 倒入层析缸中，将点样完毕的薄层板放入，待展开前沿至距原点8 cm 处，将板取出，待展开剂挥尽，置于254 nm 紫外光灯下观察，计算比移值。 阿司匹林肠溶片的杂质检查 1、游离水杨酸  取本品细粉0.3880g,用乙醇30ml分次研磨，并移入100ml容量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取滤液6ml，置50ml纳氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀，30秒内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5ml，加乙醇3ml，0.05％酒石酸溶液1ml，用水稀释至50ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深. 阿司匹林肠溶片的含量测定 1.两步滴定法  取本品细粉0.6121g，研细，用中性乙醇70ml分数次研磨，并移入100ml容量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于100ml容量瓶中，超声处理2min，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液10ml(约相当于阿司匹林0．3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇20mL，振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)40mL。置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05 mol／L)滴定，并将滴定结果用空白实验校正。每l ml氢氧化钠滴定液(0.1 mol／L)相当于18.02mg的C9H804。 2、紫外分光光度法 1） 测定波长的选择 精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解成含阿司匹林 80µg/mL 的溶液，在 240~330 nm 波长范围内扫描，得紫外吸收图谱由图谱可见，阿司匹林对照品溶液在 276 nm 的波长处有最大吸收峰，且在此波长处辅料无干扰，故选定 276 nm 的波长处为测定阿司匹林的波长。 2） 线性关系考察 精密称取阿司匹林对照品 250 mg 置于 250 mL 量瓶，加乙醇溶解，摇匀，使成 1000 µg/mL 的对照品溶液。精密吸取溶液 2.0、3.0、4.0、5.0 和 6.0 mL，分置于 50 mL 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，分别制成 40，60，80，100 和 120 µg/mL 的对照品溶液，以乙醇为空白在 276 nm 波长处测定吸收度，以浓度 C 与相应的吸光度 A 之间的关系绘制标准曲线，进行线性回归， 3） 样品测定 取阿司匹林肠溶片细粉0.6184g(约相当于阿司林 200 mg)，置 250 mL 量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液 5 mL 置 50 mL 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。在 276 nm 的波长处测定吸光度. 3、HPLC法 1)仪器与试药 仪器:HP1100 高效液相色谱仪 ；岛津 UV-2550 紫外分光光度仪；AG285 电子平。 试药:阿司匹林对照品；样品；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 2)方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流动相：甲醇-1%冰醋酸溶（43:57）； 检测波长：276 nm；流速：1 ml/min；柱温：30℃；进样量：20 μl； 理论板数按阿司匹林峰计算不低于 5 000。 2.2 对照品溶液的制备 取阿司匹林对照品 25 mg，精密称定，置 50 ml 量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液；精密量取对照品贮备液 10 ml，置 100 ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，除去包衣，混合均匀，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林 0.2 g），置100ml容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取 5 ml，置200 ml容量瓶中，加流动相溶液(甲醇-1%冰醋酸溶（43:57）)稀释至刻度，摇匀，用 0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。 2.5线性关系考察 取阿司匹林对照品 16 mg，精密称定，置 50 ml 量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 0.5、2.5、5.0、7.0、9.0 ml 分别置 50 ml 量瓶中以流动相溶液稀释至刻度 ，精密量取各浓度对照品溶液 20 μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明阿司匹林进样量在 3.242～58.356 μg范围内， 呈良好的线性关系。 2.7)样品的测定 分别取对照品溶液和供试品溶液20uL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积外标法计算标示量的百分含量. 四、实验结果 （一）阿司匹林肠溶片的鉴别 水杨酸反应：显紫堇色，与药典记载一致。证明供试品确实为阿司匹林肠溶片。 乙酰水杨酸的水解反应：析出白色沉淀，并放出醋酸的臭味，与药典记载一致。证 明供试品确实为阿司匹林肠溶片。 薄层色谱鉴别： 比移值 第一组 供试品 0.53 对照品 0.52 参比 0.39 第二组 供试品 0.54 对照品 0.54 参比 0.44 供试品与对照品的比移值基本相同，证明供试品中确实为阿司匹林肠溶片。 (二）阿司匹林肠溶片的杂质检查 游离水杨酸的检查：对照品溶液的颜色比供试品溶液的颜色深。证明供试品中游离水杨酸的含量未超过杂质限量。 （三）阿司匹林肠溶片的含量测定 1.两步滴定法 计算公式：百分标示量= EMBED Equation.KSEE3 
（ EMBED Equation.KSEE3 
:V-V0 T:滴定度；F:校正因子； EMBED Equation.KSEE3 
：平均片重；W：取样量；B：标示量）已知：F= EMBED Equation.KSEE3 
=1.149;T=18.02mg; 项目 消耗硫酸体积(mL) 百分标示量(%) 平均百分标示量(%) 供试品 1 11.00 73.2 76.00 2 11.12 60.7 3 10.80 94.1 空白 11.70 2、紫外分光光度法 浓度(ug/mL) 吸光度A1 吸光度A2 吸光度A3 吸光度均值 40 0.378 0.379 0.380 0.379 60 0.455 0.455 0.452 0.454 80 0.572 0.572 0.583 0.576 100 0.608 0.608 0.609 0.608 120 0.823 0.825 0.825 0.824
计算公式: 百分标示量= EMBED Equation.KSEE3 
（C：浓度；D:稀释倍数； EMBED Equation.KSEE3 
：平均片重；W:取样量；B：标示量） 吸光度(A) 浓度(ug/mL) 百分标示量(%) 平均百分标示量(%) 供试品1 0.538 74.5 93.125 92.96 供试品2 0.537 74.3 92.875 供试品3 0.537 74.3 92.875 供试品中阿司匹林的百分标示量为92.96%。 3、HPLC法 浓度(ug/mL) 峰面积 3.22 —— 16.1 253224 32.2 470433 45.08 43894 57.96 107313
线性关系考察结果:阿司匹林在取样范围内没有良好的线性关系，所做数据不能使用。 讨论与反思 薄层色谱鉴别过程中，第一组对照品与供试品的比移值并不完全相同，而第二组的却相同，后来查看薄层板的过程中发现其溶剂前沿并没有薄层板底部平行，因此出现操作错误。理论上两者的比移值应该是完全相同的。 含量测定三种方法的平行比较  = 1 \* ROMAN \* MERGEFORMAT I、两步滴定:此法所用仪器价廉易得，操作简单快速，且影响本法的试验条件与环境因素较少，但是人为误差比较大。本实验所需的中性醇、滴定液、酚酞试