病毒的分离方法

病毒的分离方法一般情况下分离病毒可以用传代细胞原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒大致过程应该是这样的第一获取病毒分离样品这个要求比较高采集后如果不能立即操作则必须低温保存并尽快送实验室操作另外也可以冷冻保存一般情况下病毒是不容易冻死的当然某些特殊病毒除外这需要查阅相关资料第二病毒分离操作将获取病样研磨并冻融至少一次当然研磨过程中必须低温同时研磨应充分在研磨时可以加入生理盐水或PBS或者直接加细胞培养液研磨完全后冻融一到三次冻融的目的是为了让细胞完全破裂将细胞内的病毒释放到溶液中然后低速离心取上清用022微米的滤膜过滤去过滤后的液体接种细胞此时须注意并不是所有病毒接种是都需要让细胞完全长满细胞瓶一般是不能产生细胞病的病毒最好在细胞长到40左右接种而能产生细胞病变的则需要完全长满细胞瓶以后再接种病毒接种过程中为避免污染可以加入双抗或者其他抗生素第三接种后观察某些能产生细胞病变的病毒很容易观察直接在显微镜下就能看是否分离成功如果病毒不产生细胞病变则需要用其他的方法来检测比如可用荧光抗体染色PCR或者其他方法不过大部分情况下第一代都不容易看到或者效果不好这时你可以再传几代试试如果再传四五代以后都没有的话那恭喜你你失败了或者你的方法有问题或者根本就没有你要分离的病毒或者在分离过程中你的病毒就已经死了用细胞分离病毒大概就是这个过程当然某些病毒可能还没有相应的传代或者原代细胞如果要分离就只能用易感动物了操作都是相似的无非都是采样样品处理接种接种后检测观察收集病毒而已上面说到的方法都是从动物组织中分离当然如果不是组织比如你要从粪便或者尿液或取的拭子上分离则可直接将其用生理盐水PBS或细胞培养液稀释要尽量摇匀如果是拭子的话应多挤压摇匀然后离心取上清过滤接种细胞就可以了