常用蛋白标签

重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类分别为表达宿主为大肠杆菌哺乳动物细胞的以及慢病毒载体宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞除了必要的复制和筛选的元件协助表达和翻译的元件外本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下His6His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签可插入在目的蛋白的C末端或N末端当某一个标签的使用一是能构成表位利于纯化和检测二是构成独特的结构特征结合配体利于纯化组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力可用于固定化金属螯合层析IMAC对重组蛋白进行分离纯化使用Histag有下面优点1标签的分子量小只有084KD而GST和蛋白A分别为26KD和30KD一般不影响目标蛋白的功能2His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用后者在纯化包涵体蛋白时特别有用用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白使复性不受其它蛋白的干扰或进行金属螯和亲和层析复性3