正交设计法优选四妙勇安汤提取工艺.docx

1正交设计法优选四妙勇安汤提取工艺马麟梁永枢段启摘要目的优选四妙勇安汤组方提取工艺方法以绿原酸和哈巴俄苷两种成分含量之和为考察指标采用正交试验设计筛选最佳提取工艺测定方法采用法结果以两种成分含量之和计正交试验各因素对实验结果影响大小为提取溶剂提取次数溶剂量提取时间结论四妙勇安汤最佳提取工艺为用倍量乙醇回流提取次关键词四妙勇安汤提取工艺正交试验绿原酸哈巴俄苷四妙勇安汤始载于清代鲍相敖著验方新编中为治疗热毒型脱疽的经典古方由金银花玄参当归甘草味药组成具有滋阴降火和营解毒的功效在现代临床广泛应用于血栓闭塞性脉管炎等周围血管病的治疗因此将本方研制成新的中药制剂具有良好的临床应用前景在本组方中绿原酸和哈巴俄苷分别为君药金银花和玄参的主要有效成分是制剂工艺优选和质量控制的主要指标目前该方中尚没有同时测定这个成分的报道本文建立了用高效液相色谱法同时测定本方中绿原酸和哈巴俄苷含量的分析方法并以种成分含量之和为考擦指标采用正交试验法优化其提取工艺为本方的新药开发研究奠定良好的基础仪器与试药仪器岛津高效液相色谱仪二极管阵列检测器2数据处理系统超声波清洗器昆山超声仪器有限公司试药金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾玄参为玄参科植物玄参的干燥根当归为伞形科植物当归的干燥根甘草为豆科植物甘草的干燥根及根茎以上药材均购自四川新荷花中药饮片有限公司由成都中医药大学中药学院付强博士鉴定绿原酸批号和哈巴俄苷批号对照品购自中国食品药品检定研究院试剂甲醇和乙腈公司产品乙醇和磷酸国药集团上海化学试剂公司分析纯上海纯水系统方法干膏的制备取四妙勇安提取液置水浴上蒸干于真空干燥箱中烘至恒重取出置干燥器中冷却即得含量测定色谱条件色谱柱流动相为乙腈磷酸水梯度洗脱流动相组成见表流速检测波长柱温进样量在该色谱条件下样品中主要成分能够达到基线分离相邻色谱峰的分离度符合要求色谱图见图3对照品溶液的制备分别精密称取绿原酸对照品哈巴俄苷对照品置于量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度作为贮备液精密量取该贮备液置于量瓶中加甲醇稀释至刻度分别制成浓度为的对照品溶液供试品溶液的制备取四妙勇安汤干膏适量相当于生药精密称定置具塞锥形瓶中精密加入甲醇振摇使溶解精密量取置量瓶中加甲醇定容至刻度滤过即得标准曲线制备及线性关系考察精密量取上述绿原酸和哈巴俄苷对照品贮备液分别置于量瓶中加甲醇至刻度摇匀滤过进样以峰面积对浓度进行线性回归得回归方程线性范围及相关系数结果见表精密度试验取同一对照品溶液重复进样次每次分别测定绿原酸和哈巴俄苷峰面积所测峰面积的分别为和表明该仪器精密度良好重复性试验取同一批样品分别制备份供试品溶液测定绿原酸和哈巴俄苷峰面积计算含量测定结果的分别为4表明该方法的重复性良好稳定性试验取同一供试品溶液分别在进样测定峰面积结果表明供试品溶液在内稳定性良好绿原酸和哈巴俄苷峰面积的分别为和结果正交试验设计因素水平确定根据上述单因素考察结果按处方比例取金银花药材等约精密称定电热套回流提取条件下选取提取溶剂提取时间溶剂量提取次数四因素每个因素选择个水平设计提取工艺见表正交试验设计及结果按表进行试验每个试验号平行份按项及项下制备供试品法测定绿原酸和哈巴俄苷的含量以种有效成分之和为考察指标结果见表和表讨论四妙勇安汤的味组成药材均为中国药典收录品种药典相关品种项下均有含量测定本方的金银花和玄参为君药本研究测定的绿原酸和哈巴俄苷分别为药典收录的金银花和玄参项下含量测定指标之一考察此二者的含量之和应能达到测定其有效成分的目的有关四妙勇安汤的法测定已经有少数报道但同时测定5绿原酸和哈巴俄苷的尚属首次法的条件主要参考中国药典一部金银花和玄参项目绿原酸和哈巴俄苷的色谱条件并综合照顾到二者同时测定做了适当的调整检测波长选为主要是二者均有较强吸收峰灵敏度较好正交设计是优化制剂工艺的有效方法该法方便准确可减少试验次数节省试验时间和费用本试验中的正交设计是根据药物特性及预实验结果等因素综合确定的分析试验结果由表和表可知影响四妙勇安汤提取工艺的最大因素是提取溶剂其影响因素主次关系为提取溶剂提取次数溶剂量提取时间其最佳提取工艺是本方作为效果良好的经典古方具有较大的开发价值本研究所建立的方法可作为该方进一步进行制剂工艺研究和质量控制研究的基础参考文献彭怀仁项平中医方剂大辞典精选本北京人民卫生出版社国家药典委员会中国药典年版一部北京中国医药科技出版社李伟东王光宁蔡宝昌法测定四妙勇安汤有效部位中绿原酸阿魏酸的含量中医药学刊余国祥茆玉国雷群忠等法测定四妙勇安汤中绿原酸的含量解放军药学学报6李凌军闫滨李梅毛细管区带电泳法测定四妙勇安汤中绿原酸阿魏酸甘草酸的含量药物分析杂志叶绿萍李启军刘小意正交试验法优选绞股蓝软胶囊基质的最佳配比现代医院杨明艳马相锋李洪玉等正交设计法优选消癖健乳巴布膏水提工艺现代医院