海洋胶原的质量控制
海洋胶原热稳定性差、工艺控制要求高,迄今,仍缺少对海洋胶原的
国际通用标准。鉴于海洋胶原与陆地胶原的高度相似性,目前国内外
已有的海洋胶原类产品生产中,通常参考陆地源性胶原的相关标准。
1、外观
海洋胶原〈粉末、海绵等多种) 外观理论为白色或淡肉色,原料预处
理不彻底, 工艺中杂质的带入及加工成型中的变性或变质等因素均会
导致不同程度的颜色变化。观察外观除了应关注色质外, 还应注重杂
物的混入,如是否出现黑点、絮凝物等。若产品为凝胶或溶液,更应
清澈透明。
2、水分含量
固体胶原水分含量要求 15% (mm) 以下。
3、灼烧残酒
一般要求低于 2%,若为医用体内植入人类海洋胶原,则建议控制灼
烧残渣在 1%以下。
4、蛋白质含量
一般要求不低于 90%,医用级海洋胶原原则应不低于 95%。
5、氨基酸组成
一般用郑有睛氨酸含量来表征胶原的纯度及品质优和。 陆生胶原的羟膊
氨酸一般在 10%以上,而海洋胶原产及氨酸含量则因生长环境、种
类的不同而有所区别。|1 型海洋胶原不含色氨酸,甘氨酸约占氨基酸
总量的 1/3, 存在羟赖氨酸和羟且氨酸,羟哺氨酸与策氨酸之比为0.77,
并且兰肺氨酸含量高于羟闲氨酸,这些特征都复合 1 型胶原的氨基酸
组成特点。1| 型海洋胶原中甘氨酸含量 30%-34%,, 绩氨酸、和蛋氨酸、
蜡亮氨酸等氨基酸残基含量更高,芳香族氨基酸 〈酷氨酸、苯丙氨酸
等) 含量较少,不含色氨酸, 此外,还含有较多的丙氨酸、少量的酷
氨酸和组氨酸,是典型中型胶原的氨基酸组成特征。|| 型海洋胶原中
亚氨基酸含量也普遍低于陆地动物,但组氨酸、精氨酸等践行氨基酸
含量及甘氨酸、亮氨酸、酷氨酸等极性氨基酸按量高于陆地动物。
6、色氨酸测定
胶原中不含有色氨酸,反之,证明胶原纯度不够好,这是其区别于非
胶原的重要特征之一
了7、分子量
不同来源的、 不同原料种类及不同制备工艺的海洋胶原分子量并不相
同,但有一定规律性如罗非鱼皮胶原 SDS-PAGE 电泳分析时可得 4
条样品条带,分子量分别为 330.30kDa、263.64kDa、118.47kDa、
109.64kDa; 海盘车 | 型胶原的 SDS-PAGE 电泳图谱上仅有 2 条样
晶带,对应的分子量分别为 87.9kDa 和 84.0kDa: 1型海洋胶原〔铠
鱼) 的 SDS-PAGE 电泳图谱则在 110kDa、200kDa、300kDa 附近
各有样品条带。
8、傅立叶变换红外光谱
1) 1型鱼皮胶原: 酰胺A波峰数出现在 3416.19cm-处,为 N-H 键的
伸缩振动峰,证明鱼胶原样品中有大量氢键的存在: 酰胺 B 波峰数
出现在 2932.31cm-处,代表 CH2 非对称性振动峰, 也是胶原与其他
蛋白的特征峰之一。酰胺1波峰数出现在 1656.11cm-处,是 C-O 键
伸缩振动峰。 酰胺由波峰数出现在 1553.27cm-处,代表 C-N 伸缩振
动峰和 N-H 弯曲振动峰。
2) 1型鱼胶原:酰胺 A 带一般出现在 3400-3450cm-,主要与 C=O
键的伸缩振动有关,或由氢键和 COO-共同产生,是胶原二级结构的
典型标志区域,酰腕 B 谱带是由酰胺 A 与酰胺外带的泛频偶合的结
果: 酰胺谱带的 C=O 伸缩振动峰的出现在 1640-1655cm-;, 酰胺 外
谱带的吸收峰在 1540-1560cm-,由 N-H 键振动和 C-N 键的伸缩振
动产生,为 ol 螺旋、B 折登、转角和无规则卷曲登加产生的吸收带;
1200-1400cm-为 N-H 的伸缩振动峰和 COO-的对称收缩振动峰,这
是其他蛋白质所没有的红外光谱特征:1200-1360cm-谱代归属于酰
胺 川, 酰胺 山 谱带主要由同相 N-H 弯曲振动和 C-N 伸缩振动共同引
起。
9、圆二色谱 (CD 色谱) 分析
1) 1型鱼胶原,a 螺旋构想的 CD 谱在 222nm、208nm、208nm 处
呈负峰,在 190nm 附近