培养基质量控制

物理性状的质量控制 应包括 20C -25 尼时的 pH,并应观察以下内容: 加入培养基的量和(或)琼脂层的 厚度、颜色、透明度、是否存在肉眼可见的杂质、凝胶稳定性/夭稠度(一致性)、 湿度。 灭菌前后都应测定 pH,采用连接可渗透陶器型液体接头的电极测定液体培养基的 pH, 固体培养基可用平头电极或者连接微型探头的电极测定 pH ,测量时尽量使培 养基温度降到 20C-25C，校正通常用接近 40 gWL 的氢氧化钠或者 1 moL 的盐 酸。 微生物的质量控制 1污染检测 在每批制备好的培养基中应当选取部分样品进行污染测试。 2.质控菌株 质控菌种应具有稳定特性, 能代表其种并能有效地证明实验室特定培养基的最佳 性能。 测试菌种应可溯源至国家或国际公认的菌种收藏中心, 也可以是实验室自 己分离的具有良好特性的菌种, 但必须对照标准菌株进行鉴定。 实验室应检测和 记录储存菌株(stock culture)的相关特性，新复苏的菌种可能会有非特异性反应- 最好使用从食品中分离的菌种。 培养基的质控菌种应具备以下性能: 具典型反应的强阳性菌种， 弱生长的阳性菌 种(选择更敏感的菌种);无生化反应的菌种; 完全抑制菌种。 3,质控方法 国际食品微生物委员会和培养基菌种卫生工作组(WPCM)介绍了培养基评估用 测试菌种的有效收集方法。 (D即用培养基和试剂 商品化即用培养基的生产厂家如果经过 IS0 9001 和 ISO 9002 体系认证或满足相 应质量要求，应向使用方提供资质证明。这时，使用者就不必对培养基进行大量 的测试工作，但必须保证其储存条件。 (2)采用商品化合成脱水培养基制备的培养基 按ISOTS 11133-1: 2009 《食品和动物饲料的微生物学 培养基制备和生产指南 第 1 部分: 实验室培养基制备质量保证通则》的要求，除了对每批制备好的培养 基用标准菌株进行测试外,还应用实际样品进行检测，以更好地保证培养基的质 量。对于不含指示剂或选择剂的培养基，只需用阳性测试菌种进行测试。对于含 有指示剂或选择剂的培养基, 必须使用能证明其指示或选择作用的菌种进行试验。 对于复合培养基，即需要加入添加成分的培养基, 要用具备上述性能的菌种逐批 进行检验。对实验室制备的需加入添加成分的制成培养基同样适用。 G)按照培养基配方制备的培养基  建议除了按照上述方法进行培养基品质测试外, 还要用改良的 Miles-Misra 技术、 螺族平板技术或菌落总数技术进行测试，以监控基础材料的质量、培养基性能和 实验室内部的配制规范。实际上，食品中包含有应激反应的微生物,还应考虑到 培养基在应激细菌恢复方面的适用性。 培养基性能测试方法 实验室可采用半定量和定量技术对固体、液体培养基的性能进行测试，在多数情 况下能满足对培养基性能测试的要求。 对于特殊情况, 如评价一种新的培养基或一个新的生产商的产品等, 应采用定量 测试法。 1.固体培养基 应用于国体培养基质控程序的技术大都依告菌落计数。 主要应用的技术有: 倾注 法、涂布法、旋转涂布法、改良的 Miles-Misra 方法、半定量划线法和定性划线 法。 这些方法作为食品实验室的晶党方法得到了国际公认。由于倾注法、涂布法 及螺旋涂布法在日常工作中经常使用, 这里不再介绍, 着重介绍一下改良的 Miles -Misra 方法、半定量划线法和定性划线法- (改良的 Miles-Misra 方法 改良的Miles-Misra方法是通过测试培养基的生长率(productivity ratio PR)来检查 培养基的性能，通党与对照培养基相比。 对了照培养基应当是富含营养物质的培养 基，如: 胰酷腺大豆琼脂- 该方法步骤如下: 加将试验苗株的过夜培养物用缓冲蛋白及水 10 信梯度稀释。 加将试验和对照培养基做成 4mm 厚的平板，并使平板表面干燥。 加从最高稀释度(如 10-5)开始，分别滴 1 滴稀释液于试验平板和对照平板标记好 的区域。 国每个稀释度各取 4 滴分别加入 4 个试验和对照培养基, 每 1 漓的涂布超过四分 之一平板，并用涂布器从高稀释度开始涂布，37 局培养 8h- 名对数量和菌落形态进行评价。 评价方法，即按下列方式计算: PR=NSNo 式中: PR--生长率; NS-试验培养要的菌落数， No-对照培养基的苗洲数。 示例， 在 10-3 稀释度,试验培养基上为 20 个菌落, 对照培养基上为 25 个菌落， 则PR-080- OO)半定量划线法  使用本方法时，所有测试培养基应干燥到相同程度，且整个步骤应标注化,以便 于比较同批次培养基的测试结果。 用 luL 接种环划线平板。在 A 区用接种环按 0.5cm 的间隔划 4 条平行线，按同 样的方法: B 区和 C 区划线，最后在 D 区内划一条线。按标准方法所规定的培 养时间和温度进行培养- 通常情况下用同一接种环对 A 区~D 区进行划线，在不同区域划线时不需对接种 环灭菌。但为了得到低生长指数 G1,在 A 区和 B 区接种应更换接种环或对其进 行灭菌。 评价方法; 培养后，评估菌落的形状、大小和密度，并计算生长指数 G1。每条 有菌落生长的划线记作 1 分，每个培养四上最多为 16 分。如果仅一半的线有菌 落生长，记作 0.5 分。如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线一半，则记作 0 分。记录每个平板的得分总和便得到 G1.。 例如: 菌落在 A 区和 B 区全部生长， 而在 C 区有一半线生长，则 G1 为 10。 目标菌的生长指数 G1 大于6 时，则判定培养基可接受。非选择性培养基的 G1 值通常更高.目标菌应呈现典型的生长, 而非目标菌的生长应部分或完全被抑制。