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正交试验法优选当归多糖的提取工艺 2010 剂药物制剂班丁国营 摘要 目的: 优选并确立当归多糖的最佳提取工艺。方法 以当归多糖得率为指 标，采用正交实验法对提取过程中水用量 (A)，提取时间 (B)，提取次数〔C) 及醇沉浓度 (D) 4 因素进行优选研究。结果: 对多糖得率有影响的因素是提取 时间与提取次数。结果表明，荫优提取工艺为 12 倍用量水，提取时间 2h，提取 次数 2 次,醇沉浓度为 50%, 即以多糖得率为考察指标的最优提取工艺为4B:CD,- 关键词 ”当归多糖: 提取工艺; 正交实验法， 中药研究 AbstractTo optimize and establish optimum extraction of Angelica polysaccharides， Methods: Angelica polysaccharide yield index，orthogonal experiment method for the extraction process water consumption (A)， extraction time (B), extraction times (C) and heavy alcohol concentration (D) 4 Optimization of factors, Results: The rate of polysaccharide influential factor is the extraction time and extraction times. The results showed that the optimum extraction process is 10 times the amount of water extraction time 3h, extraction times 2，the best density of ethanol depositing angelica polysaccharide 60%，that is，the indexes polysaccharide yield optimal extraction process is ABCD Key words 。 angelica polysaccharide，extraction technology:， orthogonal experiment ;medicine research 当归, 别名泰归、云归、西当归、岷当归, 尤以甘肃眠县当归品质最佳， 有“中 国当归城” 之称。当归被广泛应用在中药的复方和验方中,随着对中要的广泛开 发和利用，当归的主要被分离、纯化，并且进行相应的结构确定。当归多精主要 成分是被分离、纯化、并且进行相应的结构确定。当归多糖是当归中主要生物活 性物质“，采用水提、醇沉和离子交换树脂和凝胶树脂的综合利用，当归多糖已 经被分离出来"。生物学和药理学研究显示，当归多糖在抗肿瘤、肝损伤、免疫 作用的方面有明显的作用””。 1 实验部分 试剂与仪器 当归药材取自甘肃岷县,苯酚，95%乙醇， 无水乙醇，乙醚,丙酮，哇哈哈水。 电子天平，离心机; 纱布， 电炉子; 锅 1 个; 8 个 100ml 烧杯 1 个 500ml 烧杯: 9 个 500ml 的矿泉水瓶子，抽滤瓶，吸耳球，2ml 移液管 3 个 50ml 容量 瓶， 9个 10ml 试管，紫外可见分光光度计- 2 实验方法  2.1 影响提取效果主要因素的选择: 选取用水量，提取时间，提取次数，醇沉 浓度，作为考察因素，每个因素拟定 3 个水平〈见表 1)，选用L (3') 正交表- 表1 因素水平表 因素 水 用 B C D 平“加水量(倍) 提取时间 Ch) ”提取次数 (次) 。” 醇沉浓度 〈%) 1 8 1 1 50 2 10 15 2 60 3 12 2 3 E 2 2 正交实验设计: 取当归粉未 9 份，每份 10g，按正交方案进行提取，按正 交方案进行醇沉，加醇量 1:3，静置一夜，其问有系状沉淀产生。在 3000r/min 下离心 imin，沉淀分别用适基无水乙醇，乙酝，丙醋依次洗涤，50尼烘干至恒 重。最后得 9 份干燥的粗多糖。 2. 3 ”供试液的制备: 取粗多糖约 12. 5mg，精密称定，置 50ml 容量瓶中，加蒸 饮水溶解并稀释至刻度，即得。 2.4 总糖含量标准曲线的绘制: 称取 105C干燥至恒重的葡萄糖约 50mg，精密 称定，至 100ml 容量瓶，加芝馏水溶解，并稀灰译刻度，即得。精密吸取对照品 溶液 0. 0m1，1.0n1，2. 0n1，3. 0n1，4 On1，5. 0n1，7. 0n1，分别轩于 25nl 容 量瓶中，加蒸馆水定容。精密移取上述溶液各 2m1，分别加入 5中茶酚 Iml，扬 匀后迅速如入 5ml 浓硫酸，混匀，1L~2min 后于沸水液中加入 30min，取出自然冷 却 60min，取出于 492nm 波长处测定吸光度，以吸收度A 对应浓度Y回归，得: 回归 方程: Y=0.4120At0.1962， (〈 r=0.9995 ) ,线性范围: 0.0201gmgy/ml ”0. 1413mg/ml。 2. 5 ”供试液中总糖含草的测定: 精密基取供试液 2n1，按“总糖含基标准曲线” 项下操作，测定A值并代入回归方程计算多糖含量- 多糖得率=沉淀重X 多糖含量/取样量X100% 3 。 结果与讨论 3.1 选取水用量、提取时间、提取次数、酵沉浓度、作为考察因素，因素水平见 表2 表 2_正交实验结果 试验号 因素 多戎得率% 人 B C D  1 1 1 1 1 0.527 2 1 2 2 2 3.625 3 1 3 3 3 3.110 和 2 1 2 3 1.002 5 2 2 3 1 4和.125 6 2 3 1 2 2.412 7 3 1 3 2 2.121 8 3 2 1 3 0.995 9 3 3 2 1 5.927 的 T.262 3.650 3.65 。 10.579 民 7.539 8.745 10.554 8.158 民 9.043 11.449 11.449 5.107 R L781 7.779 7.779 5490 由表2 得出: 以粗多糖的得率为指标，以提取时间，提取次数，加水基，醇 沉浓度，为影响因素，综合多糖得率及节省能源等因素考虑，确定最优工艺为 ABCD,，即: 加 12 信量水，提取 2 次，每次 2 小时，加 95%乙醇浓度为 50%，醇 量1:3. 3. 2 ”优选工艺的验证试验，测得多糖得率平均值为 2 65%，相